viernes, 28 de noviembre de 2014

Práctica 2. Acción de la amilasa sobre el almidón



Acción de la amilasa sobre el almidón

Autores del grupo 523

Guzmán Favila Gabriela
Gómez Vieyra Karen
Hernández Ramírez Tania Karina
Ramírez Rico Eder Romario
Soria Águila Manuel Canek


Preguntas generadoras:

¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?
La enzima amilasa degrada el almidón para así formar azucares más simples como la glucosa, es decir, de moléculas complejas pasa a moléculas simples. Las moléculas de glucosa atraviesan la pared intestinal y posteriormente llegan a la sangre.

¿Cómo está formado el almidón químicamente?
El almidón es un polisacárido formado por la polimerización de miles de monómeros de glucosa que forman largas cadenas. El almidón está realmente formado por una mezcla de dos sustancias, amilasa y amilo pectina.

¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?
La amilasa es un enzima que tiene la función de digerir el glicógeno y el almidón Es una biomolecula.  

¿Cuál es papel que desempeña el almidón en los animales?
Los carbohidratos son nutrientes esenciales, el almidón es uno de ellos, y sirve para proporcionar energía a los animales y en caso de ser necesario ser “guardado” como reserva.

¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?
Sin la amilasa las largas cadenas de azucares que conforman los almidones no serian digeridas por los animales y se desecharían del cuerpo de estos, sin absorbidas por las células.

Hipótesis

Las enzimas que componen la amilasa romperán los enlaces del almidón. La prueba que haremos con el yodo o con el lugol creemos que dará positivo al no haber hidrólisis del almidón, con el Benedict dará positivo si es que existe hidrólisis del almidón el color que tomará será color marrón, debido a la presencia de glucosa permitiendo identificar a los azúcares reductores.

Objetivos:
·         Identificar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón
·         Identificar los productos de la acción de la amilasa sobre el almidón
·         Caracterizar la digestión enzimática realizada por la secreción de las glándulas


Introducción

¿Qué es la saliva?
La saliva (también conocida coloquialmente como baba) es un fluido orgánico complejo producido por las glándulas salivales en la cavidad bucal, e involucrada en la primera fase de la digestión.
La saliva puede ser vehículo de contagio de enfermedades en humanos, como el herpes labial o la mononucleosis.

Producción
Se estima que la boca está humedecida por la producción de entre 1 y 1.5 litros de saliva al día, durante la vida de una persona se generan unos 34.000 litros. Esta cantidad de saliva es variable ya que va disminuyendo conforme avanzan los años y debido a diferentes tratamientos. La producción de saliva está relacionada con el ciclo circadiano, de tal manera que por la noche se segrega una mínima cantidad de saliva.
La saliva es segregada por las glándulas salivares mayores parótida y submaxilar (80%- 90%)) en condiciones estimuladas, mientras que las glándulas sublinguales producen solo el 5% del total. Las glándulas menores son responsables básicamente de la secreción en reposo y contribuyen al 5% al 10% del total de saliva secretada. La disminución patológica de saliva recibe el nombre de hipo salivación o hiposialia, mientras que la sensación de sequedad bucal se denomina xerostomía, y la producción excesiva, sialorrea.
La medición de la producción de la saliva se llama sialometría.

Características y composición de la saliva
La saliva es un líquido transparente y de viscosidad variable, lo cual se atribuye al ácido siálico. Es inodora como el agua. La composición y pH de la saliva varían en función de los estímulos (como el olor o la visión de la comida). El pH salival normal oscila entre 6,5 y 7.3
La composición de la saliva es similar a la del plasma y se caracteriza por los siguientes componentes:
Agua: Representa un 99,5 %.4 5 Permite que los alimentos se disuelvan y se pueda percibir su sabor a través del sentido del gusto.
Iones cloruro: Activan la amilasa salival o ptialina.
Bicarbonato y fosfato: Neutralizan el pH de los alimentos ácidos y de la corrosión bacteriana.
Moco: El contenido de mucina, glicoproteina fundamental de la saliva, produce la viscosidad necesaria para funciones lubricantes y de formación del bolo alimenticio que facilita la deglución a lo largo del tubo digestivo, sin dañarlo. 6
Lisozima: Es una sustancia antimicrobiana que destruye las bacterias contenidas en los alimentos, protegiendo en parte los dientes de la caries y de las infecciones.
Enzimas: Como la ptialina, que es una amilasa que hidroliza el almidón parcialmente en la boca, comenzando la digestión de los hidratos de carbono. La lipasa lingual inicia también la digestión de grasas.6
Estaterina: Con un extremo amino terminal muy ácido, que inhibe la precipitación de fosfato cálcico al unirse a los cristales de hidroxiapatita. Además, también tiene función antibacteriana y antifúngica.
Otras sustancias: La saliva contiene también inmunoglobulinas específicas, transferrina y lactoferrina. En el 2006 investigadores franceses del Instituto Pasteur identificaron una sustancia en la saliva humana que llamaron Opiorfina, similar a la encontrada en ratas y vacas, que es hasta seis veces más potente que la morfina para calmar el dolor. 7 2
Calcio: La saliva está saturada de Ca++, con lo que se evita que los dientes lo pierdan y ayuda a digerir el alimento.

Relación estructura-función en las proteínas
Las proteínas son biomacromoléculas, cuyos precursores son los aminoácidos que se unen entre sí a través de enlaces covalentes denominados enlaces peptídicos, lo que da lugar a la cadena peptídica. A la secuencia de aminoácidos en la cadena, se le denomina estructura primaria y esta información se encuentra codificada en los genes presentes en el ácido desoxirribonucleico. La estructura primaria covalente (información secuencial) de la proteína, determina la estructura tridimensional (información conformacional) y, a su vez, esta determina la función, que ejerce mediante el reconocimiento molecular. Esta característica general de las biomacromoléculas recibe el nombre de relación estructura-función.

¿Qué es la amilasa salival?
La amilasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-Amilasa al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples. Se produce principalmente en las glándulas salivales (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia). Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien la bautizó en un principio con el nombre de "diastasa".

Usos
Sirve en el diagnóstico de enfermedades determinando sus niveles en plasma para saber si se puede producir una pancreatitis. Sus niveles pueden estar elevados por un daño a las células productoras de la enzima en el páncreas, o bien, por una deficiencia renal (excreción reducida).
Otro uso puede ser en la fabricación de pan, para romper azúcares complejos como el almidón (presente en la harina) en azúcares simples. La levadura utilizada en este proceso puede entonces alimentarse de esos azúcares simples y convertirlos en productos de fermentación. Este proceso da sabor al pan y hace elevar la masa. Las células de la levadura contienen amilasas pero necesitan tiempo para fabricar la suficiente cantidad para romper el almidón. Este es el motivo de la necesidad de largos tiempos de fermentación (especialmente para determinadas masas). Las técnicas modernas de elaboración de masas incluyen la presencia de amilasas para facilitar y acelerar estos procesos.
Algunas amilasas bacterianas se emplean como detergentes para disolver almidones en determinados procesos industriales.
En la maduración de frutas la amilasa es sintetizada durante la maduración, degradando el almidón de las frutas en azúcar, y volviéndolas más dulces.


Material

Papel filtro
Embudo
5 tubos de ensayo
2 goteros
2 cápsulas de porcelana

Material biológico:
Muestra de saliva

Sustancias:
Agua destilada
Almidón
Reactivo de Benedict
Reactivo de Lugol para almidón

Equipo:
Balanza granataria electrónica
Parrilla con agitador magnético


Procedimiento

A. Obtención de la enzima amilasa
Después de enjuagar la boca, mastica un trozo de papel filtro  para estimular la salivación. Los líquidos segregados se van pasando a un embudo que tenga un papel filtro, el filtrado se coloca en un tubo de ensayo hasta obtener 1  ml.
La saliva así obtenida se diluye empleando 1ml de saliva y 10 ml de agua destilada, así se obtiene la preparación de enzima base.
Se prepara una solución al 2% de almidón, para lo cual se pesan 2 g de almidón y se disuelven en 100 ml de agua destilada
Se colocan 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo se le agregan 2 ml de la solución de almidón al 2% y 2 ml de la solución base de la enzima. En otro tubo se colocan 2 ml de agua destilada y se le agregan 2 ml de la solución de almidón al 2%.
 Los tubos se colocan en baño maría a 37° C, durante 15 minutos dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón
Una vez transcurridos los 15 minutos se sacarán los tubos del baño maría y se harán las pruebas del lugol y Benedict

B. Reacciones de lugol para almidón y Benedict
La prueba del yodo o el lugol permite identificar la presencia de almidón, con este reactivo se obtiene un color azul-violeta característico. Toma 1 ml de la disolución de cada uno de los tubos y añade unas gotas de lugol a cada una de ellas. Si no existe la hidrólisis del almidón la prueba será positiva.
La prueba de Benedict permite identificar a los azucares reductores. Toma 1 ml de cada uno de las disoluciones de los tubos y agrégales 1 ml del reactivo de Benedict, enseguida coloca ambos tubos en baño María, si existe hidrólisis del almidón se formará un precipitado rojo ladrillo que indica la presencia de azúcares como la glucosa y la maltosa.

       Prueba de Benedict                                                            Baño María

 











Resultados

Contenido del  Tubo
Reacción de Lugol
Reacción de Benedict
Amilasa+ almidón +agua
Negativa (Color café)
Positiva (Color Rojo ladrillo)
Almidón+agua
Positiva (Color Azul)
Negativa (Color Azul)





 Prueba positiva con lugol                                                  Prueba negativa con Benedict




                                             Prueba positiva con benedict



Discusión de los resultados
Pudimos concluir como la  enzima amilasa actuó sobre el almidón, hubo una simplificación de moléculas en donde el polisacárido almidón fue simplificado a monosacáridos como lo es la glucosa, esto se hizo evidente gracias a los reactivos que aplicamos.

Replanteamiento de la hipótesis
Nuestra conclusión resulto correcta, ya que la amilasa simplifico el almidón en monosacáridos (Glucosa).

Conclusiones
En conclusión en esta práctica comprobamos la importancia de las enzimas, principalmente de la amilasa, en el proceso de digestión, ya que sin ella sería imposible para el organismo digerir el almidón.

Conceptos clave
Enzima: Las enzimas son proteínas que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además de su importancia como catalizadores biológicos.
Digestión: La digestión es el proceso de transformación de los alimentos, previamente ingeridos, en sustancias más sencillas para ser absorbidos. Se pasa de polímeros a monómeros.

Digestión química: Se inicia en la boca, cuando el alimento se mezcla con la saliva y continúa en el estómago y en el primer tramo del intestino delgado. Consiste en un ataque químico, llevado a cabo fundamentalmente por enzimas. Como consecuencia de este ataque, las moléculas orgánicas complejas que forman el alimento se descomponen en sus unidades básicas.

Degradación: es la parte del metabolismo que consiste en la transformación de biomoléculas complejas en moléculas sencillas y en el almacenamiento adecuado de la energía química desprendida en forma de enlaces de fosfato y de moléculas de ATP.

Azúcares simples: son en sí hidratos de carbono que nos aportan grandes cantidades de calorías vacía, o que simplemente no nos aportan nutrientes al organismo, por eso se las llama de esa manera.

Azúcares complejos: Los carbohidratos complejos están hechos de moléculas de azúcar que se extienden juntas en complejas cadenas largas. Dichos carbohidratos se encuentran en alimentos tales como guisantes, fríjoles, granos enteros y hortalizas.

Polímeros: La materia está formada por moléculas que pueden ser de tamaño normal o moléculas gigantes llamadas polímeros. Los polímeros se producen por la unión de cientos de miles de moléculas pequeñas denominadas monómeros que constituyen enormes cadenas de las formas más diversas.

Monómeros: es una molécula de pequeña masa molecular que unida a otros monómeros, a veces cientos o miles, por medio de enlaces químicos, generalmente covalentes, forman macromoléculas llamadas polímeros.

Relaciones. Este tema es importante porque permite observar en el laboratorio la acción de las secreciones de las glándulas salivales, las que llevan a cabo una digestión química de los polisacáridos, apoya a los estudiantes en la construcción del concepto de digestión química y permite comprender la función de algunas glándulas asociadas al aparato digestivo. 


Bibliografía y cibergrafia

1. Viera NT, Morales TT, Morón AI, Navas RM, Pedreañez AB. Parámetros inflamatorios en saliva y sangre en niños y adolescentes sanos. Rev Cubana Estomatol  [revista en la Internet]. 2011  Sep [citado  2012  Mar  31]; 48(3): 299-307.Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75072011000300002&lng=es

2. Scarano E, Fiorita A, Picciotti PM, Passali GC, Calò L, Cabras T, et al. Proteomics of saliva: personal experience. Acta Otorhinolaryngol Ital. 2010 June; 30(3): 125-30.

3. Dawes C. Salivary flow patterns and the health of hard and soft oral tissues. JADA. 2008;139(5 suppl):18S-24S..

4. Cardellá L, Hernández R, Upman C, Vicedo A, Pérez A, Sierra S. Bioquímica Médica. La Habana: Ecimed; 1999, p. 137, 211, t.I.

5. UNAM y PAPIME. Programa de biología III: ELABORACIÓN DE UN MODELO CONSTRUCTIVISTA DE ESTRATEGIAS DE APRENDIZAJE BASADAS EN IDEAS PREVIAS PARA LA ENSEÑANZA DE LOS CONCEPTOS BÁSICOS DE LAS ASIGNATURA DE BIOLOGÍA III.

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